INOKULASI MIKROBA

INOKULASI MIKROBA

       Mikroba merupakan organisme berukuran kecil yang sulit untuk dilihat tanpa menggunakan peralatan bantu. Banyak diantara mikroba yang memiliki kemiripan bentuk dan sifat sehingga tidak mudah untuk mempelajarinya. Diperlukan ketelitian dan kesabaran untuk mempelajari mikroba. Salah satu cara yang dapat dilakukan untuk mempelajari mikroba adalah dengan mengidentifikasinya. Ada empat tahapan yang harus dilaksanakan apabila hendak melakukan identifikasi mikroba, yaitu inokulasi, inkubasi, isolasi dan identifikasi. Keempat tahapan ini dilaksanakan secara sistimatis dan benar sehingga mikroba dapat teridentifikasi.

Pemanfaatan suatu mikroorganisme dalam bidang teknologi semakin banyak digunakan misalnya dalam menghasilkan berbagai produk seperti bahan pangan, industri, pertanian, obat-obatan, dan lain sebagainya. Pemilihan mikroorganisme yang tepat untuk suatu tujuan tertentu dan pemanfaatan mikroorganisme secara maksimal perlu didukung oleh suatu metode inokulasi  dan identifikasi yang baik.

Melakukan teknik inokulasi suatu mikroorganisme, dilakukan dengan cara yang aseptis untuk menghindari terjadinya kontaminasi dengan mikroorganisme
lain. Kebanyakan mikroorganisme dapat diinokulasi dalam biakan murni dengan memindahkan suatu koloni, mensuspensikan kembali dalam cairan dan menanamnya kembali pada sebuah medium yang steril dan selektif. Inokulasi merupakan percobaan yang sangat penting, karena melihat kondisi lingkungan di sekitar kita yang banyak terdapat mikroorganisme  baik yang patogen maupun yang non patogen, sehingga pemisahan dan identifikasi bakteri yang satu dengan lainnya.

Sebelum dilakukan teknik inokulasi pada suatu mikroba, penting untuk melakukan proses pengenceran bertingkat menggunakan larutan fisiologis. Pengenceran bertingkat merupakan salah satu proses dalam inokulasi. Pengenceran bertingkat dilakukan untuk mengurangi jumlah mikroba sehingga jumlah koloni pada cawan mudah dihitung. Pengenceran bertingkat menggunakan larutan fisiologis yang terdiri campuran NaCl dan aquades dengan takaran yang telah ditentukan. Larutan fisiologis adalah larutan yang digunakan dalam proses pengenceran bertingkat. Larutan fisiologis mampu menjaga tekana osmotik antara cairan di luar sel dan cairan di dalam sel sehingga mikroba yang diencerkan tidak mengalami lisis. Larutan fisiologis terbuat dari campuran NaCl 0,85% dan aquades. Hal ini sesuai dengan Nurjannah dan Fajrihanif (2010) yang menyatakan bahwa larutan pengencer yang sering digunakan adalah larutan garam fisiologis (NaCl 0,85%).

Teknik-teknik dalam melakukan inokulasi mikroba yaitu terbagi menjadi 2 cara, yaitu metode spread plate (metode sebar) dan metode pour plate (metode tuang).

a.       Metode Spread Plate

Spread plate adalah teknik menanam dengan menyebarkan suspensi bakteri di permukaan agar, agar diperoleh kultur murni. Prosedur kerjanya adalah suspensi cairan diambil sebanyak 0,1 ml dengan mikropipet kemudian teteskan diatas permukaan
agar yang telah memadat. Kemudian suspensi diratakan dengan meratakannya menggunakan hockey stick pada permukaan agar. Penyebaran akan lebih efektif bila cawan ikut diputar. Kelebihan teknik ini adalah mikroorganisme yang tumbuh dapat tersebar merata pada bagian permukaan media agar sedangkan kelemahan pada teknik ini adalah metode ini cukup sulit terutama saat meratakan suspensi dengan hockey stick, untuk menumbuhkan koloni secara merata, biakan justru terkontaminasi. Oleh karena itu, hockey stick harus benar-benar steril, yaitu dengan cara disemprotkan dengan alkohol 70%. Hal ini sesuai dengan Waluyo (2005) yang menyatakan bahwa teknik spread plate (cawan sebar) adalah suatu teknik di dalam menumbuhkan mikroorganisme di dalam media agar dengan cara menuangkan stok kultur bakteri atau menghapuskannya di atas media agar yang telah memadat.

b.      Metode Pour Plate

Metode pour plate (cawan tuang) adalah suatu teknik untuk menumbuhkan mikroorganisme di permukaan media agar dengan cara menuangkan stok kultur bakteri di atas permukaan media agar sehingga sel-sel tersebut tersebar merata dan baik di permukaan agar tersebut kemudian setelah stok kultur bakteri telah tersebar merata, media agar dituangkan kembali di atas stok kultur bakteri. Metode ini diperlukan pengenceran sebelum ditumbuhkan pada medium agar di dalam cawan petri. Setelah diinkubasi akan terbentuk koloni pada
cawan tersebut dalam jumlah yang dapat dihitung. Metode pour plate sangat
mudah dilakukan karena tidak membutuhkan keterampilan khusus dengan hasil biakan yang cukup baik. Keuntungan dari metode pour plate adalah hanya sel yang masih hidup yang dihitung, beberapa jenis mikroba dapat dihitung sekaligus, dan dapat digunakan untuk isolasi dan identifikasi mikroba karena koloni yang terbentuk. Kelemahan metode pour plate adalah hasil perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel mikroba yang sebenarnya, karena beberapa
sel yang berdekatan mungkin membentuk satu koloni, medium dan kondisi yang berbeda
mungkin menghasilkan nilai yang berbeda, mikroba yang ditumbuhkan harus
dapat tumbuh pada
medium padat dan
membentuk koloni yang kompak dan
jelas, tidak menyebar, dan memerlukan persiapan dan waktu inkubasi beberapa hari sehingga pertumbuhan koloni dapat dihitung. Hal ini sesuai dengan Ramadhani (2014) yang menyatakan bahwa metode pour plate sangat mudah dilakukan karena tidak membutuhkan keterampilan khusus dengan hasil biakan yang cukup baik.

 Faktor-faktor yang mempegaruhi inokulasi  yang pertama yaitu suhu atau temperature. Temperatur merupakan salah satu lingkungan fisik yang penting  bagi kehidupan mikroorganisme. Jenis-jenis mikroorganisme tertentu dapat hidup dalam kisaran suhu yang luas sedangkan jenis lainnya pada kisaran suhu yang sempit. Secara keseluruhan batas kisaran suhu kehidupan mikroorganisme terletak antara 10^oC–90^oC. Kedua adalah kelembaban dan Kadar Air. Kelembaban dan kadar air biasanya berpengaruh terhadap  pertumbuhan dan pembentukan alat pertahanan mikroorganisme. Ketiga adalah tekanan osmosis larutan hipertonis (pekat) menghambat pertumbuhan bakteri karena dapat menyebabkan plasmolisis atau kerusakan membran  plasma. Keempat yaitu derajat keasaman. Setiap mikroorganisme mempunyai kisaran hidup pada pH tertentu yang terdiri atas pH minimum, optimum dan maksimum. Bakteri mempunyai kisaran pH untuk pertumbuhan sekitar daerah netral antara 6,5-7,5. Sedangkan khamir di daerah asam antara 4,0-4,5. Lingkungan abiotik lainnya yang memengaruhi  pertumbuhan mikroorganisme masih sangat banyak misalnya toksik, arus listrik, radiasi, tegangan permukaan dan tegangan mekanik. Hal ini sesuai dengan Suriawiria (2005) yang menyatakan bahwa Faktor-faktor penting yang mempengaruhi pertumbuhan mikroba, suplai energi, suhu/temperatur, keasaman atau kebasaan (ph), dan ketersediaan oksigen.

DAFTAR PUSTAKA

Dwidjoseputro, D. 2002. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: Djambatan.

Hidayat, N., M. C. Padaga dan S. Suhartini. 2006. Mikrobiologi Industri. Yogyakarta: Gajah Mada University Press.

Nurjanna., dan Fajrihanif. A. 2010. ‘Penentuan Nakteri Sulfat Reducing Bacteria (SRB) dan Sulfur Oxidazing Bacteria (SOB) dengan Menggunakan Pelarut yang Berbeda’. Jurnal Media Akuakultur. 5(1) 47-50.

Ramadhani. R.N. 2014. Analisis Bakteri Eshericia coli pada Air Sumur Bor di Sekitar Laboratorium Biomassa Universitas Lampung Menggunakan Colony Counter. Lampung: Universitas Lampung.

Semangun, Haryono. 2007. Penyakit-penyakit Hortikultura di Indonesia (edisi kedua). Yogyakarta: Gajah Mada University Press.

Suriawiria, U. 2005. Mikrobiologi Dasar. Jakarta: Papas Sinar Sinanti.

Waluyo, L. 2005. Mikrobiologi Umum. MM Press: Malang.

Wasteson, Y, and Hornes, E. 2009. Pathogenic Escherichia Coli Found in Food. International Journal Of Food Microbiology. (12) 103-114.